無菌操作是微生物實驗、細胞培養等工作的基石。看似簡單的操作背后，卻隱藏著許多容易忽視的誤區。

在實驗室環境中，一次微小的污染事件便足以導致長達數周的實驗工作前功盡棄。無論是珍貴細胞系被真菌污染而喪失活性，還是關鍵微生物實驗因雜菌侵入而宣告失敗，均凸顯出無菌操作技術在保障實驗成功中的核心地位。熟練掌握規范的無菌操作，不僅是一項基礎實驗技能，更體現了科研人員嚴謹的科學態度與專業的實驗素養。

常見誤區與糾正指南

1乙醇消毒：萬能抑或局限？

? 錯誤認知：

在實驗操作中，一種普遍存在的誤解是認為僅依靠酒精棉球對手部或臺面進行擦拭即可實現有效去污，甚至將乙醇溶液視作可替代一切滅菌措施的“萬能解決方案”。這種觀念往往導致對實驗器械及操作環境進行徹底滅菌的忽視，從而埋下污染隱患。

? 糾正指南：

75%的酒精具有最佳的殺菌效果，但它只能表面消毒，無法達到滅菌要求（即殺死所有微生物包括芽孢）。對于手術器械、培養基、試管等，必須采用高壓蒸汽滅菌（121℃, 20-30分鐘）或干熱滅菌等物理方法。

實用貼士：

酒精擦拭后，務必等待其自然風干，揮發的過程才是殺菌的關鍵。切勿心急用嘴吹或用手扇。

2無菌手套：物理屏障或潛在污染源？

? 錯誤操作：

戴上無菌手套后，下意識地摸了摸頭發、調整了眼鏡、甚至接聽了電話……這些動作都會讓手套瞬間從“無菌”變為“有菌”。

? 糾正指南：

將手套視為你的“第二層皮膚”。它本身并不無菌，你的手在哪個位置，手套就在哪個位置被污染。一旦觸摸了非無菌區域，應立即用75%酒精噴灑消毒或更換新手套。

實用貼士：

在超凈臺內準備一個小型免洗消毒液瓶，隨時對手套進行消毒。操作時，手臂盡量不要離開臺面區域。

3超凈工作臺：相對潔凈而非絕對無菌

? 錯誤操作：

在超凈臺內擺放過多物品，操作時手臂頻繁穿梭，快速移動產生氣流，甚至有人在臺內大聲說話、咳嗽，這些都會破壞臺內的單向流氣流，導致污染。

? 糾正指南：

1. 物品分區：將臺面分為三區。清潔區（遠離操作者的一側）放置待使用的無菌物品；操作區（中間）進行實驗；污染區（靠近操作者的一側）放置廢棄物品。

2. 提前準備：將所有所需物品一次性放入臺內，并經過紫外線照射30分鐘后再開始操作。

3. 動作輕柔：所有操作都應緩慢、輕柔，避免擾亂氣流。

4接種環燒一燒就夠了？

? 錯誤操作：

將接種環在火焰外焰隨意晃兩下，沒有燒至通紅，或者灼燒后未冷卻就直接蘸取菌液，燙死了待操作的微生物。

? 糾正指南：

采用全程灼燒法：先將接種環（針）豎直插入火焰最底部的藍色內核部分，直至整體燒紅，并保持3-5秒。然后，灼燒可能進入試管的金屬桿部分。最后，在空氣中冷卻數秒（可靠近手背感知溫度，不燙即可），再進行取樣。

實用貼士：

灼燒后冷卻的接種環在放入菌液時不應發出“滋”的聲音。

5培養基暴露：規范操作與無菌控制

? 錯誤操作：

打開培養皿或試管蓋后，長時間暴露在空氣中，或者將皿蓋完全取下、隨意放置。

? 糾正指南：

1.培養皿：打開時，應將皿蓋開啟一個小于45°的縫隙，剛好足以完成劃線或涂布操作即可。操作完成后立即蓋好。

2.試管/三角瓶：開啟后，瓶口應迅速過火，利用氣流原理形成屏障，防止空氣中的雜菌落入。操作后同樣迅速過火并蓋緊。

實用貼士：

暫時不用的已倒平板，可用封口膜或Parafilm封口膜密封邊緣，防止水分蒸發和污染。

無菌操作是一場與無處不在的微生物進行的“隱形戰爭”。勝利的關鍵在于嚴謹的態度、規范的操作和對細節的極致追求。記住，每一次成功的實驗背后，都離不開無數個無菌操作的精準瞬間。