一、腫瘤細胞的準備

1、細胞株選擇

選擇適合的腫瘤細胞株，如乳腺癌細胞、肺癌細胞或結直腸癌細胞等，確保這些細胞株在小鼠模型中已被驗證能夠成瘤。

2、細胞的活力和狀態

確保接種的腫瘤細胞具有高活力和良好的生長狀態。在接種前，通過細胞計數、臺盼藍染色等方法評估細胞的存活率，一般來說，存活率應在90%以上。如果細胞存活率較低，可能會導致接種后成瘤效率降低甚至不成瘤。

3、細胞的濃度

選擇合適的細胞濃度進行接種。通常，每只小鼠的接種量在1×10?至1×10?個細胞之間，但具體濃度可能因腫瘤細胞類型和實驗目的而異。某些惡性程度較高的腫瘤細胞可能在較低濃度下就能成瘤，而一些生長較為緩慢的細胞可能需要更高的濃度，如某些低度惡性的甲狀腺腫瘤細胞、部分前列腺癌的腫瘤細胞等。

4、細胞的培養條件

維持腫瘤細胞在適宜的培養條件下生長，包括培養基的成分、溫度、CO?濃度等。

二、小鼠的選擇和準備

1、品系

不同品系的小鼠對腫瘤細胞的敏感性可能不同。常用的小鼠品系如BALB/c、C57BL/6等，根據腫瘤細胞株的特點選擇免疫缺陷或免疫健全的小鼠品系。如BALB/c 小鼠在乳腺癌模型中可能更容易成瘤。

2、年齡和性別

一般選擇6-8周齡的小鼠，雌性或雄性均可，但要保持實驗中性別和年齡的一致性。

老年小鼠的免疫系統可能相對較弱，對腫瘤細胞的抵抗力也會有所不同。

3、免疫狀態

如果需要研究免疫相關的腫瘤發生機制，可以選擇免疫健全的小鼠；如果要排除免疫系統的影響，可以使用免疫缺陷小鼠，如裸鼠或NOD/SCID小鼠。

4、小鼠的健康狀況

確保小鼠健康，無感染和其他疾病，以免影響腫瘤細胞的接種和生長。

5、小鼠環境準備

在接種前將小鼠適應實驗環境，確保環境溫度、濕度和光照等條件適宜。

三、接種方法

1、皮下接種

這是最常見的接種方法之一，操作簡單且腫瘤易于測量。在小鼠的側腹或背部皮下注射腫瘤細胞懸液，注射時要注意避免注入血管。

方法：先固定小鼠，右手持注射器，使針頭與小鼠皮膚呈約45度角刺入皮下，當針頭進入皮下后，會感到阻力減小，此時輕輕推動注射器活塞，將腫瘤細胞懸液緩慢注入皮下，一般注射量為0.1-0.2mL左右，具體根據實驗要求調整，注射完畢后，輕輕拔出針頭，用酒精棉球再次擦拭注射部位，防止感染。

2、原位接種

根據腫瘤的類型，選擇相應的器官進行原位接種，如肺癌細胞可以接種到肺，乳腺癌細胞可以接種到乳腺。這種方法更能模擬腫瘤在體內的自然生長環境，但操作難度相對較高。

3、尾靜脈注射

用于建立轉移模型，將腫瘤細胞注射至小鼠尾靜脈，觀察腫瘤細胞的血液傳播和轉移。

四、接種后的護理和觀察

1、觀察小鼠的健康狀況

每天觀察小鼠的飲食、飲水、活動情況、體重變化等，及時發現異常。

2、測量腫瘤大小

定期使用游標卡尺測量皮下腫瘤的長徑和短徑，計算腫瘤體積。 

如圖為不同處理組皮下成瘤實驗結果圖。

五、注意事項

1、必要時可對小鼠進行麻醉，以減少痛苦和應激反應。常用異氟烷或戊巴比妥鈉麻醉。

2、細胞注射：使用無菌注射器和細針頭（如26G或27G），將腫瘤細胞懸液緩慢注射至預定部位。皮下接種時，注射時注意避免過深或過淺，以確保細胞位于皮下組織中。

3、確保所有操作都在無菌條件下進行，減少細菌感染的風險。接種時腫瘤細胞的狀態直接影響成瘤效率，細胞應處于活躍增殖期。小鼠的個體差異可能會影響實驗結果，盡可能保證實驗的同質性。

總之，要高效地給小鼠接種腫瘤細胞成瘤，需要綜合考慮腫瘤細胞的質量、小鼠的選擇和接種方法等多個因素，并在實驗過程中進行精心的護理和觀察。