摘 要：建立測定毒品中氟胺酮含量的高效液相色譜內標法。樣品經稱量、溶解、搖勻和過濾后，經Waters symmetry®C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱分析，以磷酸-三乙胺溶液和甲醇作為流動相進行等度洗脫（體積比為70∶30），檢測波長為210 nm。氟胺酮的質量濃度在2～500 mg/L范圍內與色譜峰面積線性關系良好，相關系數為0.999 9，檢出限為1 mg/L，定量限為2 mg/L。低、中、高3個濃度水平的加標平均回收率為99.0%～102.2%，測定結果的相對標準偏差為0.71%～4.05%（n=6）。該方法分離效果和穩定性好，適用于固體毒品中氟胺酮的定量分析。

關鍵詞：氟胺酮；高效液相色譜法；內標法；毒品

氟胺酮(F-Ketamine，2F-DCK)是一種苯環利啶類精神活性物質，由王世玉等[1]于1987年首次合成，2021年7月1日正式被列入《非藥用類麻醉藥品和精神藥品管制品種增補目錄》[2]。目前氟胺酮成癮性機理尚未完全清楚[3?4]，但其在毒品繳獲物中的占比在不斷增高。目前國內毒品繳獲物中氟胺酮的定量分析方法主要有氣相色譜法[5?8]和核磁共振法[9]，在生物樣品和環境樣品中氟胺酮及其代謝物的檢測方法主要為超高效液相色譜-質譜法[10?14]。

目前液相色譜-質譜分析方法在毒品定量檢測中應用較少，主要原因是樣品濃度大，容易污染儀器，且使用成本遠高于氣相色譜法和液相色譜法等方法，因此在實際檢測工作中往往不作為毒品定量分析的主流檢測方法。氣相色譜法分離效果好，但分析時間較長，在實際工作中，隨著毒品樣品量的不斷增加，氣相色譜法已無法滿足大量樣品定量分析的需求。液相色譜法具有分離效率高、選擇性好、靈敏度高、分析速度快等優勢，與氣相色譜法相比，液相色譜法可應用于熱不穩定、高沸點、離子型物質的檢測，大大提高了樣品檢測范圍。同時，液相色譜法是法醫毒物分析領域中一項實用的檢測技術，具有較高的靈敏度，可以顯著降低檢出限，以及具有更強的適用性而被廣泛使用[15]。目前國內還未見采用高效液相色譜法測定毒品中氟胺酮含量的相關報道。為滿足大量樣品的快速分析需求，筆者建立了對毒品中氟胺酮定量分析的高效液相色譜內標法，可為涉及氟胺酮案件的檢驗鑒定提供可靠的定量方法。

1.實驗部分

1.1主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Waters e2695型，配有2998 PDA檢測器，美國沃特世科技有限公司。

電子天平：XSE105DU型，感量為0.01 mg，梅特勒-托利多國際貿易(上海)有限公司。

移液槍：10～100 μL、100～1 000 μL，法國吉爾森公司。

甲醇中氟胺酮溶液標準物質：1 000 μg/mL，上海原思標物科技有限公司。

色胺：純度(質量分數)為97%，德國默克股份兩合公司。

甲醇、三乙胺、濃磷酸：均為色譜純，德國默克股份兩合公司。

毒品樣品、空白樣品：均為送檢樣品。

實驗室用水為超純水。

1.2溶液配制

色胺溶液：稱取色胺粉末51.55 mg，置于50 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至標線，配制成質量濃度為1 000 μg/mL的色胺溶液，作為內標溶液。

氟胺酮系列標準工作溶液：分別精確量取氟胺酮標準溶液適量，均加入適量色胺溶液，用甲醇配制成氟胺酮的質量濃度分別為2、5、10、20、50、100、200、500 mg/L系列標準工作溶液，其中色胺的質量濃度均為50 mg/L。

磷酸-三乙胺緩沖溶液：準確量取3.50 mL濃磷酸，加入200 mL水稀釋；準確量取6.10 mL三乙胺，滴入上述磷酸溶液中，用水稀釋并定容至1 000 mL。

1.3儀器工作條件

色譜柱：Waters symmetry®C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，美國沃特世科技有限公司)；流量：1 mL/min；進樣體積：5 μL；柱溫：35 ℃；檢測波長：210 nm；運行時間：10 min；流動相：A相為磷酸-三乙胺緩沖溶液，B相為甲醇，A與B的體積比為70∶30；洗脫方式：等度洗脫。

1.4樣品處理

將固體樣品充分研磨，混勻，準確稱取白色粉末狀樣品2份，各10.00 mg (精確至0.01 mg)，加入適量甲醇超聲提取20 min，加入適量內標溶液，用甲醇定容至10 mL，搖勻，過0.22 μm微孔濾膜，濾液作為樣品溶液，其中內標色胺的質量濃度為50 mg/L。同法制備空白樣品溶液。

1.5定量方法

在1.3儀器工作條件下，分別測定氟胺酮系列標準工作溶液和樣品溶液，以氟胺酮與色胺的質量濃度比為橫坐標，氟胺酮與色胺的色譜峰面積比為縱坐標，繪制標準工作曲線，用內標法計算樣品中氟胺酮含量。

2.結果與討論

2.1波長選擇

在190～450 nm波長范圍內對氟胺酮標準工作溶液進行掃描，光譜圖如圖1所示。由圖1可以看出，在相同質量濃度下，色胺在219 nm處有最大吸收，氟胺酮在195 nm處有最大吸收，在216 nm處兩種物質響應一致。為了盡可能獲得較大的氟胺酮響應值，在216 nm的基礎上適當降低檢測波長，但由于190～210 nm波長屬于低波段，受到樣品雜質的干擾比較多，尤其是受到流動相中試劑純度影響較大。為了排除雜質、溶劑等在低波長處的干擾，且保證氟胺酮在分析過程中的靈敏度，最終選擇檢測波長為210 nm。

圖1氟胺酮和色胺的吸收光譜圖

Fig. 1Absorption spectra of F-Ketamine and tryptamine

2.2流動相選擇

分別考察了15 mmol/L磷酸二氫鈉溶液(含體積分數為0.2%的磷酸)-甲醇、磷酸-三乙胺-甲醇兩種流動相體系在等度洗脫條件下對待測目標物保留時間、色譜峰型和分離度的影響。結果表明，以15 mmol/L磷酸二氫鈉溶液(含體積分數為0.2%的磷酸)-甲醇作為流動相時，目標物不出峰；以磷酸-三乙胺-甲醇為流動相時，在等度洗脫條件下目標物能夠有效分離。對該流動相體系配比進行優化，結果表明，當磷酸-三乙胺溶液與甲醇的體積比為70∶30時，目標物分離度大于2，故選擇磷酸-三乙胺溶液與甲醇的體積比為70∶30作為流動相。

2.3柱溫選擇

采用磷酸-三乙胺溶液與甲醇(體積比為70∶30)為流動相，進行等度洗脫，考察柱溫分別為25、30、35、40 ℃時目標物氟胺酮和內標色胺的色譜分離效果。結果表明，在不同柱溫條件下，兩種分析物隨溫度的升高分離度逐漸增大，且均大于2，可滿足定量分析要求。此外，隨著柱溫的升高，兩種分析物的保留時間減少1%～6%。當柱溫為35 ℃時，兩種分析物的色譜峰較窄，其峰寬比另外兩種柱溫條件小1%；當柱溫為40 ℃時，兩種分析物的色譜峰分離效果與柱溫為35 ℃時的色譜峰分離效果相差不明顯。綜合考慮，最終將柱溫設為35 ℃。

2.4專屬性試驗

在1.3儀器工作條件下，分別測定毒品樣品溶液、空白毒品溶液、氟胺酮標準溶液和溶劑空白(甲醇)，色譜圖如圖2所示。由圖2可以看出，空白溶劑和空白樣品基質對2種分析物色譜峰無干擾，氟胺酮標準溶液和樣品溶液中氟胺酮和色胺色譜峰均達到有效分離，且分離度大于2。表明該方法專屬性良好，適用于色胺和氟胺酮兩種分析物的檢測要求。

圖2毒品樣品溶液、空白樣品溶液、氟胺酮標準溶液和溶劑空白色譜圖

Fig. 2Chromatograms of drug sample solution， blank sample solution， F-Ketamine standard solution， and solvent blank

2.5線性方程、檢出限及定量限

在1.3儀器工作條件下，測定氟胺酮系列標準工作溶液，以目標物和內標質量濃度比為橫坐標，目標物和內標的色譜峰面積比為縱坐標，繪制標準工作曲線，得到線性回歸方程為y=0.448 19x-0.047 23，相關系數為0.999 9，質量濃度線性范圍為2～500 mg/L。以甲醇為溶劑逐級稀釋氟胺酮標準溶液，在1.3儀器工作條件下測定，分別以基線噪聲的3倍和10倍作為氟胺酮的檢出限與定量限，得檢出限為1 mg/L，定量限為2 mg/L。

2.6加標回收與精密度試驗

選擇低、中、高3種質量濃度(2、20、200 mg/L)進行空白樣品加標回收試驗。按所建方法，每個加標水平平行測定6次，結果見表1。由表1可知，空白樣品加標平均回收率為99.0%～102.2%，測定結果的相對標準偏差為0.61%～4.05%。表明該方法準確度和精密度均符合要求，適用于毒品中氟胺酮含量的測定。

表1樣品加標回收與精密度試驗結果

Tab. 1Results of sample spiked recovery and precision test

2.7穩定性試驗

選擇低、中、高3種質量濃度(2.0、20.0、200 mg/L)進行空白樣品加標回收試驗，在1.3儀器工作條件下，連續測定3日，每日測定6次，結果見表2。由表2可知，低、中、高3個加標水平測定結果的相對標準偏差為1.18%～5.21%，表明樣品溶液在72 h內穩定性良好，滿足毒品中氟胺酮含量的測定要求。

表2穩定性試驗結果

Tab. 2Stability test results

3.結語

建立了高效液相色譜內標法測定毒品中氟胺酮的含量，分別對檢測波長、流動相、柱溫等條件進行了選擇和優化。該方法簡單、準確、精密度良好，為氟胺酮毒品的檢驗提供了方法參考。該方法主要針

對真實案例中的固體毒品樣品進行檢測，能否適用于其他非固體基質的樣品還需進一步研究。

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引用本文：梁舒婷，蒙衛寧，吳明霞，等 . 高效液相色譜內標法測定毒品中氟胺酮［J］. 化學分析計量，2025，34（1）： 54.(LIANG Shuting, MENG Weining, WU Mingxia, et al. Determination of F-Ketamine in drugs by high performance liquid chromatography with internal standard method[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2025, 34(1): 54.)