生物指示劑是一類用于監測消毒、滅菌等處理過程效果的特殊工具，是指將適當載體染以一定量的特定微生物，用于指示消毒或滅菌效果的制品。它利用微生物對消毒、滅菌因子的抵抗力強于待處理物品上可能存在的自然微生物的特點，通過檢測生物指示劑中微生物的存活情況，來判斷消毒或滅菌過程是否達到預期效果。如果生物指示劑中的微生物被完全殺滅，那么可以認為待處理物品上的自然微生物也已被有效殺滅，消毒或滅菌過程是可靠的。

一、如何選擇使用生物指示劑？

在醫療機構的滅菌生物監測中，WS310國家標準已明確規定：

1、壓力蒸汽滅菌過程為每周一次，使用壓力蒸汽滅菌生物指示劑；

2、環氧乙烷氣體滅菌為每批次都要監測，使用環氧乙烷滅菌生物指示劑；

3、低溫等離子體滅菌為每日監測一次，使用低溫等離子體滅菌生物指示劑。

以上三種滅菌方式，也是2012年醫療機構的主要滅菌方式，其中，壓力蒸汽滅菌使用最為廣泛。

二、使用方法

放置：在滅菌前，將生物指示劑放置在被滅菌物品的內部或代表性位置，確保其能充分暴露于滅菌環境中。

滅菌處理：與被滅菌物品一起進行消毒或滅菌處理。

培養：滅菌處理后，將生物指示劑取出，放入適宜的培養條件下進行培養。不同的生物指示劑培養條件有所不同，一般細菌芽孢生物指示劑需在37℃或56℃下培養24小時至7天不等。

結果觀察：根據指示系統的變化來判斷結果。如顏色由紫色變為黃色，通常表示有微生物生長，滅菌失敗；若顏色保持不變，則表明滅菌成功。也有些生物指示劑通過熒光等其他方式顯示結果。

三、生物指示劑使用關鍵參數：

可使用市售的標準生物指示劑，也可使用有日常生產污染菌監控中分離的耐受性最強的微生物制備的孢子。在生物指示劑驗證試驗中，需確定孢子在實際滅菌條件下的D值，并測定孢子的純度和數量。驗證時，生物指示劑的微生物用量應比日常檢出的微生物污染量大，耐受性強，以保證滅菌程序有更大的安全性。因此，如下兩個參數相當重要：單位重量芽孢含量及以D值。

四、執行生物指示劑挑戰試驗：證明所開發的滅菌程序實際達到了程序設計中確定的生物殺滅時間。

濕熱滅菌生物指示劑挑戰試驗：

1. 選擇恰當的生物指示劑系統。

在過度殺滅程序的確認中，循環結束F0>12，生物指示劑的D121℃應大于1。常采用生物指示劑是嗜熱脂肪芽孢桿菌等。

在采用“殘存概率法”設計的滅菌程序的確認中，生物指示劑的耐熱性應大于產品的生物負荷的耐熱性。且需結合生物負荷歷史數據，留有一定的安全系數。典型的生物指示劑包括：生梭芽孢桿菌、史密氏桿菌和枯草芽孢桿菌 5230。

考慮生物指示劑是懸浮在液體還是干燥在固體支持物上，因生物指示劑在不同介質中，其D值有很大差異。

2. 裝載在不高于下限的滅菌條件下滅菌，滅菌溫度的不高于下限，滅菌時間的不高于下限。

3. 滅菌結束后，將生物指示劑試驗系統收回實驗室，收回的生物指示劑應盡快測試，如不測試，應按要求儲存。

4. 在適宜的介質和條件下，檢查每個生物指示劑挑戰試驗的殘存數。不同生物指示劑有不同的培養條件，包括培養溫度、時間、環境、培養基等。

5. 對結果進行評價，以確保試驗中孢子的對數下降值符合預定的要求，滿足產品微生物存活概率 PNSU 小于10-6。

6. 生物指示劑挑戰試驗應作陽性對照，并確認接種部位生物指示劑數量足夠，有沒有其它干擾。

五、生物指示劑使用注意事項：

1：在最終滅菌法中，生物指示劑應放在滅菌柜的不同部位。并避免指示劑直接接觸到被滅菌物品。生物指示劑按設定的條件滅菌后取出，分別置培養基中培養，確定生物指示劑中的孢子是否被完全殺滅。

2：過度殺滅產品滅菌驗證一般不考慮微生物污染水平，可采用市售的生物指示劑。對滅菌手段耐受性差的產品，設計滅菌程序時，根據經驗預計在該生產工藝中產品微生物污染的水平，選擇生物指示劑的菌種和孢子數量。這類產品的無菌保證應通過監控每批滅菌前的微生物污染的數量、耐受性和滅菌程序驗證所獲得的數據進行評估。