問：做二氯喹啉酸的農殘分析，查閱文獻，前處理后跑液相，色譜條件：流動 相（乙腈：水=1:1，水 PH 用磷酸調到 4），流速（1ml/min），波長 225nm，進樣量 20μl 在此條件下，標樣出峰時間較早，保留時間 4min 左右，樣品峰不太分開，且 8min 左右就 不出峰。調整了流動相比例后（乙腈：水=1:3)，增加水相，保留時間確實后移了，15min左右，但峰高和峰面積明顯降低，且濃度較低的基本不能出峰。樣品峰值也極小，根本也不好判斷是不是我的目標物。
答：這是一個涉及到色譜分離時的色譜擴散問題。由于色譜填料的不規整以及色譜柱的直 徑等因素，目標化合物在色譜柱中分配分離時，會存在縱向擴散和橫向擴散的現象，導致同時進入色譜柱的目標化合物依次流出色譜柱，從而在色譜圖上呈現一個具有良好的對稱性，呈高斯分布的色譜峰。目標化合物在色譜柱中分配分離過程的周期越長，其擴散程度 越嚴重，則色譜峰越寬。因此在等度洗脫條件下，我們會看見保留時間長的化合物色譜峰 寬大于保留時間短的化合物色譜峰寬。兩個化合物的色譜峰保留時間差異越大，則兩峰峰寬的差異也越大。色譜峰寬隨著保留時間的增大而變寬，當到達一定程度上時，必然會造成色譜峰變得與基線無法分辨。
通過調節流動相組成來改善色譜峰的分離是優化色譜分離條件的主要手段之一。在日 常工作中，優化流動相中有機相的比例時，可以按 5%-10%的梯度有機相的比例去優化洗脫 條件，也可以采用梯度洗脫的方式去優化洗脫條件。
