隨著食品工業(yè)的發(fā)展，添加劑的使用越來越普遍，亞硫酸鹽（SO2）就是其中的一種。在食品工業(yè)中，二氧化硫主要應(yīng)用于作殺菌保鮮劑及漂白劑，但二氧化硫有一定的毒性，人體若過多攝入，對(duì)胃腸、肝臟有損害作用，引發(fā)呼吸困難、腹瀉、嘔吐等癥狀，引起紅血球、血紅蛋白的減少，因此嚴(yán)格控制食品中的亞硫酸鹽，是保障消費(fèi)者健康權(quán)益的重要工作。我國《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB2760-2014）對(duì)各類食品中的最大使用量，均作了明確的規(guī)定（見附表A）。而國標(biāo)規(guī)定了GB/T 5009.34-2003鹽酸副玫瑰苯胺法是測(cè)試二氧化硫的仲裁法，但方法中的一些關(guān)鍵細(xì)節(jié)未進(jìn)行展開詳述，現(xiàn)根據(jù)實(shí)際的測(cè)試經(jīng)驗(yàn)及相關(guān)的技術(shù)資料，對(duì)個(gè)別細(xì)節(jié)進(jìn)行詳述。

一、實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵試劑

• 該方法的原理是亞硫酸鹽與四氯汞鈉反應(yīng)生成穩(wěn)定的絡(luò)合物，再與甲醛及鹽酸副玫瑰苯胺作用生成紫紅色絡(luò)合物，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。由此可見，本方法的關(guān)鍵試劑有：四氯汞鈉、二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液、甲醛、鹽酸副玫瑰苯胺。

1.1 二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液

• 二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液容易給氧化變質(zhì)，經(jīng)試驗(yàn)，新標(biāo)定的1.142mg/ml的二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液避光存放在冰箱中，可穩(wěn)定一個(gè)月，一個(gè)月后必須重新標(biāo)定，具體結(jié)果見下：

• 標(biāo)準(zhǔn)方法中，使用NaHSO3作為SO2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置，此物質(zhì)穩(wěn)定性較差，有資料表明，為獲得更加穩(wěn)定的O2標(biāo)準(zhǔn)溶液，可采用Na2SO3進(jìn)行配置。

1.2 鹽酸副玫瑰苯胺溶液

• 鹽酸副玫瑰苯胺溶液的鹽酸濃度對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響很大，酸度大，顯色淺，靈敏度低；酸度低，顯色深，靈敏度高，但同時(shí)空白值也高。如果按GB/T5009.34-2003中的配置方法，必須達(dá)到以下要求：所制備的空白溶液，用1cm比色皿，以水調(diào)零，于550nm波長測(cè)定下，吸光度為0.152，用該顯色劑制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線每維克SO2應(yīng)有吸光度為0.030±0.004.，雖然方法對(duì)配置的此溶液吸光度作了要求，但因未提供所加入的具體鹽酸體積，實(shí)際測(cè)試工作中，在配置時(shí)必須摸索加入的鹽酸量是否適合。為簡(jiǎn)化配置過程，有文獻(xiàn)資料對(duì)此試劑的使用的鹽酸濃度進(jìn)行研究，一系列數(shù)據(jù)（見下表）表明：鹽酸副玫瑰苯胺溶液中鹽酸介質(zhì)的濃度在0.7mol/L~1.0mol/L時(shí)，空白吸光度較低（0.062~0.043），靈敏度較高，故在配置0.2%的鹽酸副玫瑰苯胺溶液時(shí)，可直接吸取20mL0.1%鹽酸副玫瑰苯胺溶液，加入一定量的（1+1）鹽酸，使鹽酸濃度為0.7~1.0mol/L即可使用。

1.3 四氯汞鈉試劑及甲醛試劑

• 為穩(wěn)定所測(cè)的二氧化硫，方法中用四氯汞鈉作為吸收劑，但四氯汞鈉吸收液是劇毒試劑，易對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境造成污染，有文獻(xiàn)研究，可以用低毒的甲醛緩沖溶液（稱取2.04g鄰苯二甲酸氫鉀，0.364gEDTA-2Na溶于水中，移入1000ml容量瓶，再加入5.3ml37%甲醛后，用去離子水稀釋至刻度，臨用時(shí)稀釋10倍）替代四氯汞鈉吸收液。

• 而對(duì)于顯色中用到的甲醛試劑，因36%甲醛易聚合沉淀，使用前需標(biāo)定其濃度，然后再稀釋至2g/L甲醛溶液。

二、實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵步驟

2.1 樣品前處理

• 此方法并沒有限制測(cè)試的適用范圍，原則上普遍食品只要涉及到二氧化硫的測(cè)試均可以采用此法進(jìn)行，但在實(shí)際過程中，因樣品的種類多樣，方法中所提到的三種前處理方式，未必所有樣品都適合采用，現(xiàn)根據(jù)實(shí)際檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)及相關(guān)文獻(xiàn)的研究，將方法中提及的三種類型的前處理，進(jìn)行補(bǔ)充。

• 第一類：水溶性固體試樣 在樣品溶解后，所產(chǎn)生的顏色只要是不影響比色的，均可按方法進(jìn)行，若樣品溶解后，產(chǎn)生顏色，建議采用GB/T 5009.34-2003第二法進(jìn)行測(cè)試。

• 第二類：其他固體樣品 若固體樣品加吸收液定容后，產(chǎn)生顏色，可以進(jìn)行活性炭過濾處理，具體操作是：過濾時(shí)，中性濾紙上加約2g的活性炭進(jìn)行過濾，以下按方法測(cè)定步驟進(jìn)行操作。

• 而處理中，加入20ml四氯汞鈉吸收液，要浸泡4小時(shí)以上，沉淀，過濾后備用。整個(gè)檢測(cè)過程耗時(shí)長，效率低。有文獻(xiàn)研究表明，通過超聲提取或者震蕩法，可以大大減少浸泡時(shí)間，并建議的具體操作方式是：不溶性固體樣品稱取5~10克研磨均勻的試樣，加入20ml四氯汞鈉溶液，超聲提取20min或者震蕩50min，加入亞鐵氰化鉀溶液、乙酸鋅溶液進(jìn)行沉淀，定容，過濾后取濾液備用。

• 第三類 液體試樣的處理，方法中特別提及葡萄酒的測(cè)試，但葡萄酒本身帶紅色或者紫紅色，若直接測(cè)試，顏色必然會(huì)影響最后比色效果。相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)葡萄酒的前處理，提出了以下處理方法：取葡萄酒10ml，用少量蒸餾水稀釋，加入20ml四氯汞鈉溶液搖勻，浸泡4h以上，用水定容至100ml。溶液通過放有0.5~2.0g的中速濾紙進(jìn)行過濾，制得無色溶液，取濾液，以下按方法測(cè)定步驟進(jìn)行操作。

2.2 測(cè)試步驟

• 2.2.1線性范圍

• 國標(biāo)方法中規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍是0~4ug二氧化硫，經(jīng)過試驗(yàn)，線性范圍可延伸到10ug二氧化硫，結(jié)果見下：

線性范圍的擴(kuò)大對(duì)于高含量樣品可減少稀釋帶來的誤差。

• 2.2.2測(cè)試的時(shí)間及溫度

• 顯色時(shí)間的選擇及溫度的控制是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵點(diǎn)之一。操作時(shí)，一定要確保反應(yīng)的溫度是在25~30度之間，若超過30度時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果將偏低。同時(shí)，反應(yīng)的時(shí)間也必須嚴(yán)格按照方法的要求進(jìn)行。

• 以上是對(duì)二氧化硫 鹽酸副玫瑰苯胺測(cè)試法的一些關(guān)鍵控制點(diǎn)的細(xì)化，希望對(duì)實(shí)驗(yàn)室實(shí)際操作有一定的指導(dǎo)意義。

三、參考文獻(xiàn)：

• 1、鹽酸副玫瑰苯胺比色法測(cè)定亞硫酸鹽方法的要點(diǎn)及改進(jìn)  鄭州市衛(wèi)生防疫站 孟慶玉等

• 2、鹽酸副玫瑰苯胺法測(cè)定食品中亞硫酸鹽的方法改進(jìn)江蘇省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院 王常捷等

• 3、改良副玫瑰苯胺比色法測(cè)定食品二氧化硫殘留武進(jìn)市衛(wèi)生防疫站 周英玲等

• 4、鹽酸副玫瑰苯胺法測(cè)定葡萄酒中二氧化硫的方法補(bǔ)充番禺出入境檢驗(yàn)檢疫局 安文佳等

• 5、附錄A